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L'hybridationhybridation moléculaire est une technique permettant de mettre en évidence une séquence d'acide nucléique au sein d'une cellule, d'un tissu ou d'un environnement particulier, par exemple pour localiser un locus sur un chromosome. Elle est basée sur le principe de complémentaritéprincipe de complémentarité des bases nucléiquesbases nucléiques, plus particulièrement entre les brins d'ADN ou l'ARN complémentaires.
Méthode d’hybridation moléculaire
L'hybridation peut être réalisée en phase liquideliquide (les segments complémentaires sont placés dans une solution) ou sur support solidesolide (la séquence complémentaire cible étant immobilisée pour faciliter la séparationséparation).
La séquence ADN double brindouble brin est d'abord dénaturée, c'est-à-dire que les brins sont séparés par la chaleurchaleur ou par un choc alcalin. On introduit alors une sonde nucléotidique, un segment de nucléotides correspondant au moins en partie à la séquence recherchée. Lorsqu'on refroidit progressivement la solution, cette sonde (qui peut être de l'ADN ou de l'ARN mais obligatoirement monobrin) va alors s'apparier avec le brin cible en formant des liaisons hydrogèneliaisons hydrogène : deux liaisons entre l'adénineadénine (A) et la thyminethymine (TT) (ou l'uracileuracile U) et trois entre la cytosinecytosine (C) et la guanineguanine (G). La partie de la sonde non hybridée est ensuite éliminée par lavage.
Pour repérer la séquence, on utiliser des sondes marquées avec un radioisotoperadioisotope (marquage chaud), mais il existe aussi des sondes froides à marquage enzymatiqueenzymatique ou fluorescent. Les sondes peuvent être de longueur très variable, allant de quelques centaines à quelques milliers de bases.
Applications de l’hybridation moléculaire
L'hybridation est à la base de nombreuses techniques de biologie moléculairebiologie moléculaire, notamment l'amplification et le clonageclonage d'ADN ou la fabrication de puces à ADN. Ces dernières sont utilisées pour mesurer l'expression des gènesgènes, localiser des variations ponctuelles de séquences ADN dans le génomegénome ou encore détecter des agents pathogènespathogènes (en introduisant un sonde correspondant à une partie du génome de l'organisme pathogène recherche).
